單細(xì)胞測(cè)序核心技術(shù)

BD Rhapsody: 單細(xì)胞分析工作流程

1. BD Rhapsody 核心技術(shù)之微孔板

一個(gè)微孔 =   一個(gè)單細(xì)胞 + 一個(gè)磁珠

BD Rhapsody Express單細(xì)胞分析系統(tǒng)提供的單細(xì)胞分割，以微孔為基礎(chǔ)，功能強(qiáng)大。
●   限度一套臺(tái)式設(shè)備，沒(méi)有射流泵
●   當(dāng)細(xì)胞在重力作用下沉入微孔時(shí)，可以對(duì)其進(jìn)行溫和的處理
●   每個(gè)BD Rhapsody微孔板均包括一個(gè)超過(guò)22萬(wàn)個(gè)分區(qū)的微孔陣列
●   BD Rhapsody"微孔板體積約為600μL，稀釋細(xì)胞懸浮液可直接裝入微孔板，無(wú)需將其濃縮到非常小的體積
●   由于沒(méi)有微流通道，因此不需要擔(dān)心通道堵塞的問(wèn)題
●   微孔經(jīng)過(guò)特殊處理，以防止細(xì)胞粘附在表面，并進(jìn)行深入的質(zhì)量控制

Rhapsody利用微孔進(jìn)行單細(xì)胞分離，屬于Microwell-seq。 20萬(wàn)個(gè)微孔的尺寸被設(shè)計(jì)成一個(gè)微孔恰好可以容納一個(gè)bead+一個(gè)細(xì)胞。

2. BD Rhapsody核心技術(shù)之Barcoded Bead

3. 單細(xì)胞文庫(kù)制備及測(cè)序

Single cell isolation and capture流程圖

4. BD Rhapsody技術(shù)優(yōu)勢(shì)

成本更低—— 靶向基因檢測(cè)，避免看家基因占用的大量測(cè)序數(shù)據(jù)，大大節(jié)省了測(cè)序和分析成本。

超高細(xì)胞捕獲效率—— 有效細(xì)胞捕獲率60%，遠(yuǎn)高于市場(chǎng)上目前所有大通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)。

罕見(jiàn)轉(zhuǎn)錄本，更高檢出率—— 靶向定制panel，選定特定基因組合，提高UMI計(jì)數(shù)效率，罕見(jiàn)轉(zhuǎn)錄本檢測(cè)閾值更低。

克服PCR，擴(kuò)增偏差——引入單細(xì)胞測(cè)序金標(biāo)準(zhǔn)，BD分子標(biāo)簽，降低非特異性表達(dá)。

實(shí)理更高的分辨率——可以分辨更精細(xì)、微觀的細(xì)胞群和細(xì)胞亞種群。

反轉(zhuǎn)錄的磁珠，超常穩(wěn)存儲(chǔ)——完整cDNA可在磁珠微球結(jié)構(gòu)保存長(zhǎng)3月(4度)，隨用隨取。

靈活分樣組合——提高樣品通量（最多可12個(gè)樣本同時(shí)建庫(kù)，可等分，可隨機(jī)組合）；又可以同時(shí)進(jìn)行單細(xì)胞蛋白和轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合檢測(cè)，大大降低成本的同時(shí)，也為單細(xì)胞多組學(xué)研究提供了更高效的平臺(tái)。

5. BD Rhapsody產(chǎn)品線(xiàn)overview

單細(xì)胞測(cè)序核心技術(shù)

單細(xì)胞測(cè)序核心技術(shù)